Spøgelsesjagten begynder igen! Efter at have modtaget en invitation til at bo på et luksuriøst hotel, forbereder Luigi sig på en idyllisk ferie med Mario og hans venner. Drømmen forvandles hurtigt til et mareridt, da Kong Boo afslører, at det hele var et kneb for at fange Mario og hans venner! Endnu engang assisteret af den excentriske professor K. Tastroff er det op til den mest frygtløse vovehals at vove sig ud og udforske et hotel, der er alt andet end en ideel destination...